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CSTR:16397.09.0G16000444 SIVmac251直肠途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intrarectally infected with SIVmac251

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac251中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定病毒原液TCID50滴度为5×104 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将麻醉好的实验猴放在操作台上,动物采取俯卧位以保证直肠粘膜充分暴露,缓慢将10000 TCID50的SIVmac251病毒液2mL注入肛窦处,实验猴保持此姿势30min。 4、 SIVmac251直肠感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后3、7、10、14、21、28、35、42、56、70、84天采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+和CD8+细胞绝对数。 5、 SIVmac251直肠感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SIVmac251直肠感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+和CD8+细胞绝对数。

冯育芳,王卫,许琰,等.SIVmac251不同途径感染恒河猴急性期实验研究[J].中国比较医学杂志,2007,17(2): 80-83.

CSTR:16397.09.0G16000445 SIVmac251静脉途径感染恒河猴模型 Rhesus Macaques intravenously infected with SIVmac251

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS),是由人免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus, HIV)引起,以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病,是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后,到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底,HIV已感染3690万人,2014年新增感染者200万,2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国,截至2015年5月31日,全国历年累计报告艾滋病530628例,其中艾滋病病人217457例,死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题,艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、 实验用病毒:感染毒株为SIVmac251中国恒河猴细胞适应株,中国恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度为5×103 TCID50/mL。 2、 感染动物:选用体重4-6kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常,必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1,2,5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒(SIV)易感性密切相关的4种基因(Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17)筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 3、 感染方法:将1 mL含有50 TCID50 的SIVmac251病毒经后肢静脉接种恒河猴。 4、 SIVmac251静脉感染猴样品采集和指标测定:在感染前和感染后7、14、21、28、42、56、84、112、140、168、196、231、259、287天采集EDTA抗凝血4mL,分别测定血常规、血浆病毒载量、CD4+/CD8+、CD4+细胞绝对数。 5、 SIVmac251静脉感染猴血浆病毒载量的测定:提取EDTA抗凝血浆中病毒RNA,使用SYBR Green I 实时荧光定量RT-PCR方法测定血浆病毒载量。 6、 SIVmac251静脉感染猴外周血CD4+/CD8+比值及绝对数测定:CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗体标记EDTA抗凝全血淋巴细胞,流式细胞仪测定CD4+/CD8+比值,并根据血常规结果,计算出CD4+T细胞绝对数。

1. 冯育芳,王卫,许琰,等.SIVmac251不同途径感染恒河猴急性期实验研究[J].中国比较医学杂志,2007,17(2): 80-83. 2. Chen S, Lai C, Wu X, Lu Y, Han D, Guo W, Fu L, Andrieu JM, Lu W. Variability of bio-clinical parameters in Chinese-origin Rhesus macaques infected with simian immunodeficiency virus: a nonhuman primate AIDS model. PLoS One. 2011;6(8):e23177. 3. 薛婧,蒋虹,傅春燕,丛喆,陈霆,魏强。SIVmac251感染增强恒河猴巨噬细胞对galectin-3诱导凋亡的敏感性。中国比较医学杂志,2013,23(10):67-71. SIVmac251-infection enhances the sensitivity of rhesus macaque macrophages to galectin-3-induced apoptosis. CHINESE JOURNAL OF COMPARATIVE MEDICINE. 2013,(10):67-71. 4. Cong Z, Xue J, Xiong J, Yao N, Wang W, Jiang H, Chen T, Chen Z, Wei Q, Qin C. Correlation of central memory CD4(+) T-Cell decrease in the peripheral blood with disease progression in SIVmac251-infected Chinese rhesus macaques. J Med Primatol. 2015 Aug;44(4):175-82. doi: 10.1111/jmp.12171. Epub 2015 May 6.