同型半胱氨酸(Homocystine , Hcy）在结构上与半胱氨酸、蛋氨酸相似，其在体内有多种存在形式，且大部分以二硫化物氧化形式存在。不同形式的Hcy 总称为总同型半胱氨酸，目前诊断所说的血浆同型半胱氨酸水平即体内总同型半胱氨酸水平。 Hcy 是含硫氨基酸，在体内经蛋氨酸甲基化生成，且主要通过再甲基化途径、转硫途径及释放到细胞外液这三种途径代谢。在人体内，Hcy 在血浆中的正常浓度为5-10μM，当血浆Hcy 水平超过10μM时即可诊断为高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocystenemia, HHcy)。按照血浆Hcy 水平可将 HHcy 分为轻度（10-30μM），中度（30-100μM）和重度（大于100μM）。

1 实验材料 1.1 实验动物  选择50 只健康雄性ApoE-/- 小鼠，体质量18-22 g，均购于北京华阜康华生物科技股份有限公司。饲养于中国医学科学院实验动物研究所动物中心动物房内，5只/盒屏障系统中，温度( 22±2) ℃，湿度50% ～ 60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水，IACUC号：ILAS-YZW2019001。 1.2仪器与试剂  采用全自动生化分析仪检测血浆总同型半胱氨酸（Homocystein, Hcy）、三酰甘油( triglyceride, TG) 、总胆固醇( total cholesterol, TC) 、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL)生化指标。同型半胱氨酸：DL-Hcy (Sigma-Aldrich,H4628)，使用浓度为1.8g/L。 2 方法 2.1 动物模型制备  6周龄 ApoE-/- 小鼠采用普通饲料喂养，饮水中外源性补充DL-Hcy的方式诱导伴高同型半胱氨酸的动脉粥样硬化动物模型。造模用DL-Hcy货号为 (Sigma-Aldrich,H4628)，使用浓度为1.8g/L，每三天更换一次饮水，并记录饮水量，持续造模14周，并在第6 周和12 周分别取血及主动脉窦冰冻切片检测血清Hcy水平及斑块大小以判断模型进展。 2.2 标本采集及处理  完成DL-Hcy持续干预14周后，称体重，戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠，下腔静脉取血，室温静置2h后于4℃ 3000r离心10分钟提取血清，-80℃冰箱冻存。同时取主动脉窦10%中性福尔马林中固定，30%蔗糖脱水，冰冻切片包埋剂包埋并切片；其余血管组织液氮冷冻-80℃保存。

急性胰腺炎（acute pancreatitis, AP）是一种临床常见的严重疾病，引起急性胰腺炎的机制和病理生理学改变极其复杂，胰腺组织消化酶异常活化以及大量胰腺腺泡细胞的坏死是急性胰腺炎的关键病理生理过程，目前还没有针对该疾病的分子发病机制的治疗方法，约20％的患者发生严重急性胰腺炎。最常见的原因包括胆总管结石和酒精过量，占病例的75％-85％。酒精降低胰腺炎胰蛋白酶激活阈值，导致细胞坏死。许多因素包括年龄，性别，肥胖等也涉及急性胰腺炎的发生。

1 实验材料 1.1 实验动物  选择40 只健康雄性C57BL /6 小鼠，体重16-20 g，饲养与中国医学科学院医学实验动物研究所动物房内，5只/盒，温度( 22±2) ℃，湿度50% ～ 60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水。 1.2仪器与试剂  雨蛙肽, 采用α-淀粉酶试剂盒。 2 方法 2.1 动物模型制备  采用雨蛙肽腹腔注射诱导急性胰腺炎模型，造模用药物货号为C9026，购自美国Sigma公司，用50μg/kg/.h的诱导剂量, 每隔1h注射1次, 共注射7次。距离第一次注射24h处死小鼠。 2.2 标本采集及处理 在实验结束后，称取小鼠体质量，用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧位置于动物实验台上，固定四肢，脱毛后暴漏胸腹部，采用下腔静脉采血方法。室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min，分离血清，测定淀粉酶水平。解剖小鼠腹腔，取胰腺组织，滤纸吸干后称质量，其中一块进行HE染色。其余胰腺组织分装于1.5 mL 离心管中，-80℃低温保存。

非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是代谢综合征在肝脏的表现形式，与肥胖 、胰岛素抵抗(IR) 、空腹高血糖症、血脂异常、脂肪因子变异等机体代谢异常明显相关，是目前慢性肝病最常见的病因。NAFLD是以过量的脂质在肝细胞内堆积为特征的连续疾病谱，可由单纯的肝脂肪性变性发展为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，严重时可发展为肝纤维化和肝硬化 ，NASH一旦合并肝纤维化或肝硬化则可进一步增加肝细胞癌(HCC)的发生风险。 到目前为止，NAFLD的确切发病机制尚不清楚，也缺乏特异性的治疗措施，因此针对发病机制和潜在治疗药物的研究是目前该领域的热点。动物模型可通过模拟不同的病因以及NAFLD每个阶段的组织病理学和病理生理学改变，为了解NAFLD发病机制和进展提供关键性的指导。

1 实验材料 1.1 实验动物  选择40 只健康雄性C57BL /6 小鼠，体质量16-18 g，均购于北京唯尚立拓科技有限公司，实验动物许可证号：SCXK(京) 2016-0009，饲养于中国医学科学院实验动物研究所动物房内，5只/盒，温度( 22±2) ℃，湿度50% ～ 60%，12 h 循环照明，小鼠自由摄取食、水。 1.2仪器与试剂  1）全自动生化分析仪用于检测三酰甘油( triglyceride, TG) 、总胆固醇( total cholesterol, TC) 、低密度脂蛋白(low density lipoprotein, LDL)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein, HDL) 等生化指标。2）石蜡包埋机( LEICA)。3)高脂饲料主要营养物质含量：60% 脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白质 2 方法 2.1 动物模型制备  采用高脂饮食诱导NAFLD模型，造模用饲料货号为MD12033( 60% 脂肪、20%碳水化合物和20%蛋白质) ，购自江苏美迪森生物有限公司，持续造模12周，并在第6 周、9周和12 周分别进行糖耐量和胰岛素耐量测定，检测模型小鼠是否发生糖耐量受损，从而判断模型进展。 2.2 标本采集及处理 在实验结束后，称取小鼠体质量，用1%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，仰卧位置于动物实验台上，固定四肢，脱毛后暴漏胸腹部，采用腹主动脉采血方法。室温静置30 min后，3,000 rpm，4°C离心15 min，分离血清，测定血脂水平。解剖小鼠腹腔，肉眼观察肝脏大体形态，在肝右叶同一位置切取1 块0.5 cm × 0.5 cm ×0.3 cm肝组织，滤纸吸干后称质量，其中一块进行及时冰冻切片，用于油红O染色。其余肝组织分装于1.5 mL 离心管中，-80℃低温保存。

[1] Yang Y,Li W,Liu Y,et al.Alpha-lipoic acid improves high-fat diet-induced hepatic steatosis by modulating the transcription factors SREBP-1, FoxO1 and Nrf2 via the SIRT1/LKB1/AMPK pathway.J Nutr Biochem 2014;25:1207-1217.DOI:10.1016/j.jnutbio.2014.06.001. [2] Li W,Li Y,Wang Q.Crude extracts from Lycium barbarum suppress SREBP-1c expression and prevent diet-induced fatty liver through AMPK activation.Biomed Res Int 2014;2014:196198. DOI:10.1155/2014/196198. [3] Jia L,Li W,Li J,et al.Lycium barbarum polysaccharide attenuates high-fat diet-induced hepatic steatosis by up-regulating SIRT1 expression and deacetylase activity.Sci Rep 2016;6:36209.DOI:10.1038/srep36209.

该模型主要基于我实验室已有的TC狼疮小鼠模型，通过包埋雌激素，观察其皮肤、病理、肾脏的病理变化

人类慢性狼疮性皮肤病，又称狼疮性脂膜炎，皮肤损害为结节或斑块，位于真皮深层或皮下脂肪组织，其大小、数目不定，表面肤色正常或淡红色，质地坚实，损害可发生于身体任何部位。

该模型主要基于我实验室已有的TC狼疮小鼠模型，通过长期观察，发现40周以上的小鼠出现皮肤缺损的症状，符合慢性狼疮皮肤病的表现

钟荣玉, 段新旺 ,牛海涛。一种皮肤型狼疮小鼠模型的鉴定，中国实验动物学报， 2019 年 4 月，第 27 卷 第 2 期

Zika病毒类似于其它黄病毒，基因组为单股正链RNA ，全长约10800nt 。Zika病毒基因组两端为 3’和 5’非编码区（Untranslated Regions, UTRs)，中间为编码区只有一个开放阅读框架 (Open Reading Frame , ORF) 以多顺反子的形式表达一个多聚蛋白在宿主蛋白酶的作用下分解为3个结构蛋白（衣壳蛋白 (Capsid, C)、前膜蛋白 (Precursor membrane), 和包膜蛋白 ( Envelope, E)）和 7 个非结构蛋白(Non structural ) （NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A, NS4B,和NS5）。Zika病毒通过挟持宿主内质网（Endoplasmic Reticulum，ER）和高尔基体Golgi Complex，GC的膜结构形成囊泡，为其基因组复制提供附着点。Zika病毒借助宿主的翻译系统完成结构蛋白和非结构蛋白的表达，并在囊泡上完成组装。未成熟病毒通过出芽的方式从内质网释放到细胞质，通过囊泡运输到达高尔基体，在高尔基体内 PrM 蛋白在宿主蛋白酶的作用下分解为Pr和M病毒成熟，通过细胞出泡的方式释放，进入下一个病毒生命周期。

1. 实验环境 生物安全实验室3级：参照2013年4月2日卫计委专家对新发Zika病毒生物安全评估会议指南暂定Zika病毒属于三类。将Zika动物实验在生物安全三级实验室内进行。已被我国列为按甲类传染病管理的乙类传染病，对其病原体和动物感染实验的操作应该在ABSL-3实验室中进行。   2. 实验材料 1）毒株：Zika毒株（ZKC2/2016）； 2）实验动物：SPF 8周龄雌性及雄性 BALB/c小鼠； 3）试剂：DMED培养液，RNeasy Mini Kit（QIAGEN，74106）等 4）实验仪器： 微型离心机（EASTWIN6000） 高速冷冻离心机(KUBOTA3500) 电动研磨器(德国IKA-T10) 倒置显微镜(Nikon) 实时荧光定量检测系统（ABI） 二氧化碳培养箱（Thermo371） 生物安全柜   3. 实验操作规程 3.1 动物的饲养与繁育 1）伦理申请：按照实验动物伦理要求向北京协和医学院医学实验动物研究所动物使用和伦理委员会提交实验动物使用申请表。并获得批准（批准号：ILAS-BLL17007）。 2）小鼠饲养：8周龄SPF级雌性及雄性BALB/c小鼠均饲养于SPF级独立通风屏障系统中，饲养房间温度24-26℃，每天光照约14h。动物自由饮水取食。大约每周换3次垫料。 3）BALB/c小鼠的繁育：每笼放8周龄SPF级雌性及雄性各一只，每日上午观察雌鼠的阴道栓塞。见阴道栓塞后将雄性小鼠方另一单笼饲养备用。分笼后需给母鼠添加生长繁殖饲料，大约18日后每日上午10点左右观察怀孕母鼠的生育情况。规定每天观察的生育的小鼠为0.5天；如有其他情况在10点以后观察到小鼠妊娠或妊娠完成，记作第2天生育乳鼠。初生24-36h的乳鼠用于Zika病毒攻毒。   3.2 ZKC2/2016病毒的传代 1）防护：涉及Zika病毒活病毒的所有动物实验，将动物置于具有HEPA过滤器的负压分离器中，按照Zika病毒应急生物安全手册的要求在生物安全水平3（BSL-3）的动物设施中进行，并应根据病原微生物的危害等级穿戴相应的防护用品。 2）病毒接种：中国疾病预防控制中心病毒病预防控制出血热室馈赠的ZKC2/2016，提前解冻至室温，利用美国BD公司1ml胰岛素注射器（针头较细对动物的损伤较小）吸取25ul病毒液，注射上述24-36h的乳鼠脑中缝处。注意插针、注射及取针动作要轻柔以免对动物造成过大的损失。整个过程尽量让专人操作，操作人员受过专业培训并考核合格，保证每只乳鼠注射的位置、进针深度大致相同。 3）动物观察：攻毒后轻轻地将乳鼠放回原处，攻毒后乳鼠可能会出现尿失禁的现象。攻毒后的乳鼠体温会下降，注意保温。第2天观察乳鼠若出现死亡情况将乳鼠捡出，可能是死于机械损伤，冻存于-80℃冰箱以备统一高压灭菌或直接高压灭菌。 4）动物解剖：每天观察乳鼠情况，并于攻毒后第5天经处死乳鼠。利用解剖剪刀和镊子将鼠脑取出，放到提前在冰上提前预冷的2ml EP管中。 5）组织处理：将取出的感染Zika 病毒的鼠脑带至生物安全2级实验室进行下一步操作。传第一代病毒命名为ZKC2P1,第二代为ZKC2P2，以此类推。   3.3 适应株病毒鉴定 利用本研究设计的引物Zika 535和Zika 1211C，扩增Zika 病毒核酸获得包括引物探针的区域（835-911），PCR产物纯化后连接pGEM-T Easy载体，利用pGEM-T上的T7启动子，使目的片段535-1211可以在体外转录。   3.4 ZKC2P6对乳鼠致病力 选取24-36h乳鼠9窝，调整每窝乳鼠数量为6只，随机分为三组。ZKC2P6组、ZKC2P4及模拟感染组 (Mock) 分别脑内注射25ul含1.5×107 copies ZKCP6病毒液、25ul含1.5×107 copies ZKCP4病毒液及年龄匹配的空白鼠脑研磨上清液。攻毒后1dpi、3dpi、5dpi及7dpi称量每只乳鼠的体重并记录死亡情况。每组随机选取另外3窝乳鼠，攻毒后1dpi、3dpi、5dpi及7dpi每天取三只乳鼠脑并称量重量、测量长、宽。本研究利用Zika病毒感染初生乳鼠后观察小鼠大脑皮层及脑室的变化。将上述称量脑重的鼠脑固定后进行HE染色。ZKC2P4与ZKC2P6分别脑内感染一窝乳鼠（每窝6只），第3天和第5天分别取3只鼠脑并称重，按照病毒RNA提取操作流程提取RNA。

人类上呼吸道组织和气管主要分布有唾液酸α-2,6 型受体(人流感病毒受体)；人类肺组织分布有唾液酸α-2,3 型受体(禽流感病毒受体)和唾液酸α-2,6型受体。H7N9禽流感病毒可以同时结合唾液酸α-2,3 型受体和唾液酸α-2,6 型受体，但H7血凝素与唾液酸α-2,3 型受体亲合力更高，较季节性流感病毒更容易感染人的下呼吸道上皮细胞，病毒可持续复制，重症病例病毒核酸阳性可持续3周以上。 H7N9 禽流感病毒感染人体后，可以诱发细胞因子风暴，如干扰素诱导蛋白10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白-1、白细胞介素6和8（IL-6，IL-8） 等，导致全身炎症反应，可出现急性呼吸窘迫综合征（ARDS） 、休克及多器官功能障碍综合征（MODS） 。病理检查显示肺急性渗出性炎症改变，肺出血、弥漫性肺泡损伤和透明膜形成等。

1. 实验环境 生物安全实验室3级：参照2013年4月2日卫计委专家对新发甲型H7N9禽流感病毒生物安全评估会议指南暂定H7N9禽流感病毒属于二类。将H7N9禽流感生物危害等级定位Ⅲ级。已被我国列为按甲类传染病管理的乙类传染病，对其病原体和动物感染实验的操作应该在ABSL-3实验室中进行。 独立通风笼（IVC） 2. 实验材料 1）毒株：H7N9毒株（A/Anhui/1/2013）； 2）实验动物：SPF 雌性4-6周龄BALB/c小鼠； 3）试剂：DMED培养液，RNeasy Mini Kit（QIAGEN，74106）等 4）实验仪器： 微型离心机（EASTWIN6000） 高速冷冻离心机(KUBOTA3500) 电动研磨器(德国IKA-T10) 倒置显微镜(Nikon) 实时荧光定量检测系统（ABI） 二氧化碳培养箱（Thermo371） 生物安全柜 3. 实验操作规程 1）动物分组：H7N9流感病毒感染20只4-6周龄BALB/c雌性小鼠，其中10只为临床观察组，另外10只用于检测病毒的组织分布，为解剖组（5只于感染后3天安乐并解剖，5只于感染后5天安乐并解剖）。 2）病毒接种：动物适应后使用三溴乙醇以0.02mL/g比例进行肌肉注射麻醉。麻醉后每只小鼠滴鼻接种0.05mL病毒效价为105TCID50/mL的病毒稀释液。 3）临床指标：对临床观察组（n=10）小鼠进行持续21天的观察，感染后0-14天每天记录体重和死亡率，观察动物的一般状况，包括眼、鼻、口、脸、耳、爪、四肢、肛门、尾、被毛、活动和精神状况，体重下降率超过25%为人道终点实行安乐。 4）病毒的组织分布：解剖组小鼠（n=10）感染后3天和5天各解剖5只（n=5），取脑、气管、肺、肾、眼拭子进行病毒滴度测定。 5）病毒分离：感染后第3、5天感染雪貂安乐处死，尸检时取肺、气管、肝、脾、脑、肠、心和肾组织，研磨处理后，接种MDCK细胞。每天观察病变，持续观察3d，用火鸡红细胞测定HA确认。HA方法具体为：将接种标本的MDCK上清液取出50uL，加入等体积火鸡红细胞，室温反应30min，出现凝集反应，结果为阳性。 6）H7N9病毒RNA的检测：感染后第3、5天感染雪貂安乐处死，尸检时取肺、气管、肝、脾、脑、肠、心和肾组织，研磨处理后，操作步骤：将100uL组织研磨液上清移入裂解液（Qiagen）中，放入buffer RLT（已加入1%巯基乙醇）350uL，4℃，13000rpm离心3min，将上清转移至新1.5mL微量离心管中，提取组织研磨液核酸。使用RNA一步法试剂盒，通过荧光定量PCR仪直接测定病毒载量。 7）H7N9病毒抗体检测：动物感染后不同时间点采血分离血清，-80℃下保存备用。血清H7N9病毒性抗体检测（HI方法）具体操作步骤为：每孔加入1:10~1:1280稀释的待检血清，加入8HA的病毒，室温孵育30min。此后检测凝集结果，血清凝集的效价为该血清可中和的抗体的效价。 8）病理学研究：大体观察，处死动物后，详细观察肺、心、脾、肾、肝、脑、肠以及淋巴结等组织的形态变化；病理切片准备，取处死动物的肺等组织，10%甲醛固定，石蜡包埋，常规病理组织切片处理后，HE或免疫组织化学染色后，镜检观察。

Bao L, Xu L, Zhu H, et al. Transmission of H7N9 influenza virus in mice by different infective routes[J]. Virology Journal, 2014, 11(1):185. Chen Z, Wang J, Bao L, et al. Human monoclonal antibodies targeting the haemagglutinin glycoprotein can neutralize H7N9 influenza virus[J]. Nature Communications, 2015, 6:6714. Wang J, Chen Z, Bao L, et al. Characterization of Two Human Monoclonal Antibodies Neutralizing Influenza A H7N9 Viruses[J]. Journal of Virology, 2015, 89(17):JVI.01295-15. Shuran Gong, Feifei Qi, Fengdi Li, Qi Lv, Guanpeng Wang, Shunyi Wang, Jing Jiang, Lin Wang, Linlin Bao, Chuan Qin. Human-Derived A/Guangdong/Th005/2017 (H7N9) Exhibits Extremely High Replication in the Lungs of Ferrets and Is Highly Pathogenic in Chickens. Viruses 2019, 11(6), 494. 陈霆, 鲍琳琳, 朱华, et al. 新型禽源人流感病毒（H7N9）的小鼠感染模型和传播模型建立[J]. 中国比较医学杂志, 2014(1):52-55. 吕琦, 鲍琳琳, 许黎黎, et al. 季节性流感疫苗对小鼠感染H7N9禽流感病毒的保护效力[J]. 中国实验动物学报, 2014, 22(1):44-47. 邓巍, 李彦红, 朱华, et al. BALB/c小鼠和雪貂感染H7N9禽流感病毒后的肺组织动态病理学变化[J]. 中国实验动物学报, 2014, 22(1):13-17. 朱华, 许黎黎, 鲍琳琳, et al. H7N9禽流感病毒小鼠感染动物模型的建立[J]. 中国实验动物学报, 2014(1):18-21. 吕琦, 鲍琳琳, 许黎黎, et al. 季节性流感疫苗免疫血清与H7N9禽流感病毒交叉反应[J]. 中国比较医学杂志, 2014(1):59-61. 李枫棣, 鲍琳琳, 朱华, et al. H7N9禽流感病毒在小鼠体内的适应性[J]. 中国比较医学杂志, 2014(1). 鲍琳琳, 朱华, et al. 新型H7N9病毒在同居小鼠中的传播途径[J]. 中国实验动物学报, 2014, 22(1):27-31.

手足口病是由肠道病毒引起的传染病，多发生于5岁以下儿童，表现口痛、厌食、低热、手、足、口腔等部位出现小疱疹或小溃疡，多数患儿一周左右自愈，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑炎等并发症。个别重症患儿病情发展快，导致死亡。引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），自2008年在新加坡的暴发流行，柯萨奇病毒A10型（Coxsackievirus A10，CA10）成为手足口病主要致病血清型之一，由其感染引起的手足口病爆发事件在法国、芬兰、印度等国家和地区不断被报道。2013年以前，中国多地区暴发流行的手足口病病原以EV71和CA16为主，CA6和CA10次之。2013年以后，CA10引起的手足口病比例逐渐上升，成为国内手足口病感染的优势病原体之一。CA10共分为A～G的7个基因型。目前国内外大多通过与周边地区或其他国家的流行株进行核苷酸和氨基酸的同源性对比，来分析CA10的流行情况。在我国，CA10近年来在多地区流行的病毒株保持着较高的同源性，与其他国家的分离株之间的同源性距离较远，具有地域分布特点以及一定的时间分布特点。CA10传染性强、隐性感染比例大、传播途径复杂、传播速度快，在短时间内可造成较大范围的流行，疫情控制难度大。 CA10病毒主要通过粪口途径传播，主要经胃肠道进入机体内。病毒在入侵的局部上皮细胞中完成增殖，然后病毒侵入局部淋巴组织中继续增殖并释放入血导致第一次病毒血症。病毒随血液传播接触到正常靶细胞。病毒表面的VP1蛋白与靶细胞表面特异性受体结合，完成吸附过程，其基因组RNA进入胞质。之后，病毒以其正链RNA作为模板，合成互补的负链RNA，又以负链RNA为模板合成病毒正链RNA，从而得到大量病毒RNA，进入子代病毒颗粒组装阶段。通过转录、翻译，复制出二代病毒，再次释放入血形成第二次病毒血症并引起临床症状。目前有大量研究表明，手足口病患儿的细胞免疫出现紊乱，并且这种免疫紊乱在重症与死亡病例中表现得更加严重。肺水肿被认为是感染的患儿中是最为严重的并发症之一，脑干的损伤则被认为是导致肺水肿的重要因素。很多研究表明参与细胞免疫的诸多炎性因子，例如IL-1、IL-6、IL-10、IL-13、IFN-γ、TNF-α的增加、T细胞亚群CD3+CD4+，以及自然杀伤细胞（NK）等，与肺水肿的发生具有相关性。 CA10易感染5岁以下年龄的幼儿，潜伏期多为2-10天。CA10感染儿童多引起轻型手足口病，患儿往往无明显的早期症状，大多数病人预后良好。临床上，往往表现为多发的斑丘疹和（或）疱疹，最多见于手足口、臂及膝关节。典型疱疹通常突出皮肤表面，呈现黄豆粒大小，圆形或椭圆形，其内液体混浊，常无疼痛和瘙痒感，约1周时间疱疹可自行消退，通常不留疤痕。病人或伴有发热、流涕、咳嗽、食欲不振、恶心、呕吐或腹泻等症状，一般能自愈，无后遗症。但少数儿童感染CA10后出现严重并发症，如脑膜炎、脑炎、急性弛缓性麻痹和神经呼吸综合征等。随着CA10流行程度的增加、重症病例的出现，开发针对性的抗病毒药物和疫苗成为当务之急，而建立稳定的CA10感染动物模型不仅是开发药物和疫苗的关键点之一，也为研究病毒的感染机制和机体免疫反应提供研究基础。

1.病毒准备：CA10病毒(GenBank: MF688814.1)，由医院咽拭子分离得到，在人横纹肌瘤细胞（RD）中培养、扩增，并采用反复冻融法释放病毒，离心富集病毒。具体操作如下： RD细胞经常规传代培养接种到T75细胞培养瓶，感染前弃去原培养基，细胞用含2%双抗的PBS 洗2遍，吸出PBS后加入无血清DMEM培养基。接种适量的CA10病毒后，置37℃ 5% CO2培养箱孵育1-2h；加入完全培养基继续培养。接种病毒后2-3d病变CPE达到+++～++++，将T75细胞瓶置封口袋中，-80℃超低温冰箱冻化3次。然后将培养液转移至50mL离心管中，4℃，2000rpm离心20min，沉淀细胞碎片。吸取病毒上清，分装后冻存，并测定病毒滴度TICD50。 2.实验动物：采用SPF级7日龄ICR小鼠乳鼠，母鼠自然哺乳，在ABSL-2实验室独立饲养。CA10动物模型建立实验通过IACUC审核，符合动物实验要求。 3.病毒感染：根据预实验确定的感染剂量，即104 TCID50 CA10病毒，将病毒经腹腔注射感染小鼠，注射剂量为100μl。对照组注射同等量的RD细胞上清。

艾滋病(Acquired Immunodeficiency Syndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系统严重损害为特征的传染性疾病，是20世纪危害人类健康和生命最严重的病毒性疾病之一。自美国CDC报道首例艾滋病后，到20世纪80年代中期艾滋病发展成为一个全球性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690万人，2014年新增感染者200万，2014年因艾滋病死亡120万人。艾滋病在1985年传入我国，截至2015年5月31日，全国历年累计报告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成为全球关注的公共卫生和社会热点问题，艾滋病的预防与治疗也成为当代生物医学研究的前沿热点之一。

1、实验材料：SHIVSF162P3病毒；选用体重4-6 kg的SPF恒河猴。实验前体检无异常，必须排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆转录D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴细胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相关的4种基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）筛查结果为阴性。所有感染动物必须在ABSL-3室中进行。 2、静脉途径SHIV恒河猴感染模型制作方法： 先用宠物用电推剪推去猴上肢采血部位的猴毛，左手抓住一侧后肢跗关节部位，使后肢皮下静脉怒张。用75%酒精酒精棉球消毒。右手拿吸取病毒液的注射器，针头沿静脉平行方向向向心端刺入血管，见回血后，左手放松，不再紧压，右手缓慢将病毒液推入。完毕后用干棉球压迫止血，将注射器拔出，弃在利器专用桶内。 3、给药方法：将建立稳定的SHIVSF162P3慢性感染的恒河猴，经肌肉注射3mg/kg的HIV融合抑制剂，每周给药一次，连续给药6个月。 样本收集和检测：定期收集外周血样本，提取病毒RNA和病毒DNA，测定血浆病毒载量和总病毒DNA。

[1]Chong H(#), Xue J(#), Xiong S, Cong Z, Ding X, Zhu Y, Liu Z, Chen T, Feng Y, He L, Guo Y, Wei Q, Zhou Y, Qin C*, He Y*. A Lipopeptide HIV-1/2 Fusion Inhibitor with Highly Potent In Vitro, Ex Vivo, and In Vivo Antiviral Activity. J Virol. 2017 May 12;91(11):e00288-17. [2]Chong H(#), Xue J(#), Zhu Y, Cong Z, Chen T, Guo Y, Wei Q, Zhou Y, Qin C*, He Y*. Design of Novel HIV-1/2 Fusion Inhibitors with High Therapeutic Efficacy in Rhesus Monkey Models. J Virol. 2018 Jul 31;92(16):e00775-18. [3]Chong H(#), Xue J(#), Zhu Y, Cong Z, Chen T, Wei Q, Qin C*, He Y*. Monotherapy with a low-dose lipopeptide HIV fusion inhibitor maintains long-term viral suppression in rhesus macaques. PLoS Pathog. 2019 Feb 4;15(2):e1007552.

胃肠胀气是一种人类常见的症状，其诱发原因多样。消化道传播的病毒可导致病毒性肠炎，会导致造成胃肠蠕动功能下降，容易产生胃肠胀气，而且肠道内微环境变化可导致菌群失调，进而出现胀气等症状。

实验材料 实验动物为SPF级Wistar大鼠，感染症状等与性别无明显关系，感染优选5周龄雄性大鼠。 实验使用毒株为ATCC来源H-1毒株（VR-356）。 实验环境 ABSL－２实验室， 使用负压IVC饲养动物。 使用AII型生物安全柜更换动物垫料，并进行感染等操作。 实验操作规程： 病毒扩增：在BSL-2实验室进行病毒扩增，并使用TCID50法测定病毒滴度。 使用100 TCID50／只动物进行灌胃感染。 监测动物临床表征变化。 动物处理伦理： 动物感染实验，动物的痛苦不可避免，应按照伦理审查确定研究的科学性，并根据研究需要减少动物的使用。

呼吸道感染可引起肺炎。人类儿童常见的合胞体病毒（respiratory　syncytial virus ，RSV）感染导致儿童肺部疾病，是一种广泛流行的感染性疾病。病毒的感染进行抗病毒治疗多无疗效，使用糖皮质激素的对症处置在很多情况下也没有很好的疗效。

实验材料 实验动物为SPF级BALB/c小鼠，感染症状等与性别无明显关系，感染优选３周龄小鼠。 实验使用毒株为ATCC来源PVM毒株（VR-25）。 实验环境 ABSL－２实验室， 使用负压IVC饲养动物 使用AII型生物安全柜更换动物垫料，并进行感染等操作。 实验操作规程： 病毒扩增：在BSL-2实验室进行病毒扩增，并使用TCID50法测定病毒滴度 使用1,000TCID50／只动物进行滴鼻感染 监测动物临床表征变化 监测动物死亡率 动物处理伦理： 动物感染实验，动物的痛苦不可避免，应按照伦理审查确定研究的科学性，并根据研究需要减少动物的使用。

帕金森病（Parkinson’s disease，PD）是常见的神经退行性疾病之一。最主要的病理表现为黑质纹状体多巴胺能神经系统的损伤，及神经细胞内ɑ-synuclein表达增多及其进一步聚集形成的路易氏体（Lewy body, LB）沉积。

实验动物： 8-10周龄SD雄性大鼠，用作种公鼠和结扎公鼠；4-6周龄雌性大鼠，用作超数排卵，8~10周龄雌性大鼠，用作受体。 主要试剂： 孕马血清促性腺激素(PMSG)，人绒毛膜促性腺激素(hCG)，M2培养液(M7167，Sigma)，M16培养液(M7292，Sigma)，体外转录试剂盒(Ambion)，PCR试剂盒(Takara)，luciferaseSSA检测试剂盒，琼脂糖等 主要仪器： 低温超速离心机，PCR仪，电泳仪，Leica体视镜，显微注射系统，超净工作台，培养皿(BD Falcon)，一次性注射器，无菌手术器械(剪刀、镊子、血管夹、持针器、手术缝线等)等 实验环境： 普通实验室内进行质粒构建与显微注射。SD大鼠饲养于SPF屏障环境。 实验操作规程： 供体与受体准备 供体雌鼠超数排卵：选择 4-6 周龄的雌鼠，于腹腔注射 PMSG 20 IU/只，48 h后注射hCG 20 IU/只，按1:1的比例与成年雄鼠合笼，于次日早上观察雌鼠阴栓，见栓雌鼠取卵用于显微注射。雄鼠结扎：选8-10周龄雄性大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠(40 mg/kg体重)麻醉后剪毛，75%酒精消毒，腹中线下方距阴茎2-3 cm处剪开皮肤肌肉，分别分离出两侧输精管，将镊子在酒精灯上加热后烧断输精管，关闭腹腔，待恢复2周后用于和雌鼠交配准备受体。受体假孕鼠制备：于取卵前1 d选择成年雌鼠与结扎雄鼠合笼，次日早上观察雌鼠阴栓，见栓雌鼠即作为假孕鼠用作受精卵移植。 TALEN 质粒的准备 TALEN设计靶位点位置: exon2上，kinase 的domain 前5’-T GGACACACGACGTTGGC agggcttccgcctgga GGATTATCTGATAGGAC A-3’。将构建的 TALEN质粒对分别取 10 µg 酶切线性化，酚氯仿抽提、纯化后取 1 µg 作模板，按照体外转录试剂盒的说明依次加入 NTP/CAP、10×Buffer 及 Enzyme Mix，最后加水至20 µl转录体系，于37℃水浴2 h。转录后纯化、鉴定，分装保存于-80℃冰箱。 图1. 组装后的TALEN质粒。 胚胎收集 将见栓雌鼠颈椎脱臼处死，75%酒精消毒后迅速剪开腹腔，分离卵巢输卵管和子宫，剪下输卵管置于37℃预热的M2液滴中，在体式镜下将输卵管膨大部划开，释放出卵丘-卵母细胞复合体。透明质酸酶消化去除颗粒细胞后，于M2培养液滴中洗3-5次后，移入覆盖有矿物油的M16培养液中培养以备显微注射。 显微注射 显微镜下观察可见清晰原核的卵细胞为受精卵，挑选出用于显微注射。将TALEN质粒对转录的mRNA中放入注射针虹吸，注射针尖端充满液体后安装于注射仪上，根据注射针的出液量多少调节注射压力，注射后可见胞质有明显膨胀表明成功注射入胞质。将成功注射且存活的受精卵用于输卵管移植。 输卵管移植 将见栓的假孕鼠戊巴比妥钠腹腔注射麻醉(40 mg/kg体重)，背部脊柱两侧肋骨下方剃毛，75%酒精消毒后依次剪开皮肤肌肉，可见白色脂肪体，用镊子夹住脂肪体向外牵拉出卵巢、输卵管、子宫，在体视镜下找到输卵管膨大部，用血管夹夹住脂肪体以固定输卵管在镜下合适的位置，在输卵管膨大部前方避开血管走形剪开一小口，将移卵管插入开口吹入胚胎，液体后方吹入一气泡防止液体反流。将脂肪体、卵巢、输卵管及子宫还纳入腹腔，缝合肌肉皮肤。 6. 出生大鼠鉴定 将受精卵移植的假孕鼠 单笼饲养22 d左右后观察乳鼠出生情况。新生鼠生长至 1 周以上即剪脚趾，消化液 55℃水浴消化过夜后，常规方法提基因组。对目的基因进行 PCR 扩增后送测序鉴定。 动物伦理： 用于实验的SD大鼠购自维通利华，饲养于SPF屏障环境。饲养条件为温度(24±2)℃，湿度为(50±10)%，光照周期为6:00~18:00，12 h昼夜交替。本实验中动物的使用已获得中国医学科学院医学实验动物研究所实验动物使用与管理委员会（ICUC）批准（QC18011）。