English

高级检索

数据导出
分享到:
标识符 CSTR:16397.09.0F01000917
资源中文名称 小鼠肝癌Hepa1-6荧光素酶标记细胞BALBc裸小鼠肿瘤模型
资源英文名称 Hepa1-6-LUC
疾病概述 肝癌即肝脏恶性肿瘤,可分为原发性和继发性两大类。原发性肝脏恶性肿瘤起源于肝脏的上皮或间叶组织,前者称为原发性肝癌,是我国高发的,危害极大的恶性肿瘤;后者称为肉瘤,与原发性肝癌相比较较为少见。继发性或称转移性肝癌系指全身多个器官起源的恶性肿瘤侵犯至肝脏。一般多见于胃、胆道、胰腺、结直肠、卵巢、子宫、肺、乳腺等器官恶性肿瘤的肝转移。
实验动物背景信息

Hepa1-6细胞是一种上皮样单层生长的贴壁细胞,该细胞信息来源于ATCC细胞库,该小鼠肝癌细胞系来源于在C57L小鼠中引发肿瘤的BW7756肿瘤;该细胞通过几种肝脏特异表达因子筛选(例如白蛋白、α1抗胰蛋白酶、α甲胎蛋白、淀粉酶),确认能在补充地塞米松和硒的无血清培养基中生长。

无胸腺裸鼠(Nude Mouse,简称裸鼠)目前已成为医学生物学研究领域中不可缺少的实验动物模型。经过世界各国实验动物遗传育种学家的努力,目前已将nu基因导入不同近交系动物,成为系列动物模型,仅小鼠模型一种,已建立了二十余种近交系裸鼠。由于裸鼠的免疫缺陷,在一定情况下,不排斥来自异种动物的组织移植。因此可作移植人类恶性肿瘤的接受体。根据T.Fogh等1979~1980年的报导,已有150株人的瘤细胞和人体原发癌移植于裸鼠获得成功,目前已成功地将人结肠癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、黑色素瘤、淋巴瘤、白血病、肾癌、宫颈癌、软组织肉瘤和骨肉瘤等移植于裸鼠、获得了一定百分比(35.7%)的良好生长,并可传代。若用已建株的人体肿瘤组织培养细胞作移植材料,接种后的成活率更高(41%)。

本实验中所用鼠种BALB/c-nu/nu,系1973年从丹麦引入日本中央实验动物所研究。继续培育三年后,交由日本CLEA株式会社进行生产。1980年由CLEA引入。雄鼠是无胸腺裸鼠(BALB/c-nu/nu),雌鼠是有胸腺的杂合小鼠(BALB/c-nu/+)。采用BALB/c-nu/+♀与BALB/c-nu/nu♂随机交配法进行繁殖,已取得较好成果,裸鼠的生产性能良好:受胎率达81.5%,平均产仔率8.1只/窝,平均产裸仔率3.99只/窝,每窝平均成活3.62只仔鼠,9周龄仔鼠成活率100%,其主要项目数据与日本中央实验动物研究所(CLEA)和英国实验动物中心(LAC)发表的材料基本一致。

模型制作方法

模型制作采用BALB/cA-nu裸小鼠,鼠龄5周,体重15-18g,在无特定病原体(specific—pathogen free,SPF)的饲养间饲养。

4.1细胞培养:Hepa1-6细胞为本实验室冻存

4.2构建带有筛选标记的载体:chicken-β-actin- promoter-LUC

图1荧光素酶表达载体的构建

4.3细胞转染和筛选:采用Lipofectamine 2000 Reagent转染Hepa1-6细胞。转染后,用含G418的培养液筛选细胞,获得稳定表达LUC的细胞株,选择其中高表达的克隆株扩大培养(图2)。

图2荧光素酶标记的Hepa1-6细胞阳性克隆检测

4.4肿瘤细胞的植入及活体荧光成像:收集处于生长对数期的高表达细胞株,进行裸鼠肝原位接种,采用活体荧光影像系统摄像动态观察。

模型表型数据

5.1影像分析


图3 小鼠肝癌细胞HEPA1-6-LUC肝原位移植模型的建立

应用小动物活体荧光成像系统可监测到荧光素酶在裸鼠肝脏部位的稳定表达,从第1周至第4周,随着肿瘤移植时间的增加,表达荧光素酶荧光面积逐渐增大(图3)。

动物模型的评价与验证
保存方式 冷冻
合作方式
相关文章
备注 保存地点:中国医学科学院实验动物研究所卫生部人类疾病比较医学重点实验室